血清使用常見問題

血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多，其中最普遍的還是由于血清中脂蛋白的變性所致，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，這也是造成沉淀的主要原因，但這些絮狀沉淀并不影響血清本身的質(zhì)量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者將血清分裝于無(wú)菌離心管中，2000～3000rpm離心5min。一般不建議用過(guò)濾的方法去除絮狀沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)阻塞濾膜，造成過(guò)濾困難或無(wú)法過(guò)濾。

為什么要熱滅活血清？有必要熱滅活嗎？

加熱可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng)，使補(bǔ)體去活化。通常未滅活的補(bǔ)體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，同時(shí)還能夠參與溶解細(xì)胞的過(guò)程。

諸多研究表明大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)無(wú)須進(jìn)行血清的熱滅活；而在免疫學(xué)研究和ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，推薦使用熱滅活血清。實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)正確熱滅活處理的血清，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或完全沒有促進(jìn)作用，而通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。并且熱處理過(guò)的血清，沉淀物明顯增多，倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點(diǎn)”，往往會(huì)使研究者誤以為是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又會(huì)更增多，有會(huì)使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非必須，可以不進(jìn)行熱處理，既節(jié)省時(shí)間又確保質(zhì)量。

如何避免沉淀物的產(chǎn)生？

我們建議您在血清使用的過(guò)程中，采用正確的解凍方法（冷凍→4℃→室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如冷凍→37℃）非常容易產(chǎn)生沉淀物。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久、搖晃不均勻等，都會(huì)造成沉淀增多，我們建議如非必要無(wú)須對(duì)血清進(jìn)行滅活；若必須熱滅活，應(yīng)嚴(yán)格遵守56℃，30min的原則，并隨時(shí)搖晃均勻。