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熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素（luciferin）為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase）活性的一種報(bào)告系統(tǒng),。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光（bioluminescence）,，可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光,，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。
啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄因子相互作用檢測(cè)
轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu),、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子,，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合,，這些特異性的序列被稱為順式因子。轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實(shí)現(xiàn)相互結(jié)合,，從而對(duì)基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用,。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是檢測(cè)這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合的重要手段。
miRNA與3’UTR相互作用檢測(cè)
miRNAs 與靶基因的3' UTR區(qū)域特異結(jié)合后調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),。當(dāng)3' UTR靶標(biāo)序列融合在一個(gè)熒光素酶報(bào)告基因下游并在體外表達(dá)時(shí),，miRNA通過(guò)與下游3' UTR特異結(jié)合從而調(diào)節(jié)熒光素酶的表達(dá)。通過(guò)分析熒光素酶的活性,，間接了解miRNA的靶標(biāo)調(diào)控作用和特異性,。
熒光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)流程
細(xì)胞篇
1、重組質(zhì)粒制備: 制備含有待檢測(cè)基因-Luc/Rluc的重組質(zhì)粒,；
2,、細(xì)胞系選擇: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇細(xì)胞株，通常選擇轉(zhuǎn)染效率較高的293T細(xì)胞或原代細(xì)胞等,；
3,、共轉(zhuǎn)染: 將帶有Luc/Rluc標(biāo)記的報(bào)告基因和目的基因進(jìn)行共轉(zhuǎn)染，設(shè)置不同的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),，一般為24h/48h,；
4、外界干預(yù): 轉(zhuǎn)染后,，可進(jìn)行物理/化學(xué)/病毒等的相應(yīng)刺激,；
5、細(xì)胞處理: 采用進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒依照protocol操作,；
6,、熒光檢測(cè): 使用GENios Pro 酶標(biāo)儀或具有類似檢測(cè)功能的設(shè)備進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測(cè),。
煙草葉片篇
1、制備重組質(zhì)粒
2,、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及培養(yǎng)：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化比例需要摸索,。轉(zhuǎn)化后需過(guò)夜培養(yǎng)，OD600達(dá)到0.8以上即可,；
3,、利用無(wú)針頭注射器注射葉片，（先用針頭在葉片上扎個(gè)小孔）（注射煙草頂端以下第3-5片葉片）,；
4,、暗培養(yǎng)1d，光照培養(yǎng)2d;
5,、取葉片進(jìn)行打孔,，8mm-1.5cm即可; 6、在2mL的EP管中加入預(yù)冷的小鋼珠,，放入3-4片煙草葉盤并加入適量的液氮,，使用儀器進(jìn)行研磨破碎（45Hz，30s）,，加入100μL裂解液,，10000-16000rpm離心2min，取上清20μL進(jìn)行檢測(cè),。
7,、檢測(cè)：方法同動(dòng)物細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)流程：
服務(wù)特色
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經(jīng)驗(yàn)豐富
生物信息學(xué)家協(xié)會(huì)協(xié)助分析啟動(dòng)子區(qū)域,，精準(zhǔn)定位,，多方實(shí)驗(yàn)。
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資源豐富
完善的載體資源庫(kù)和啟動(dòng)子資源庫(kù),，能夠方便,、快捷的為客戶提供便利服務(wù)。
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一站式服務(wù)
提升客戶體驗(yàn)是我們不懈的追求,，立體化的上下游實(shí)驗(yàn)體系讓您省心,。
客戶提供
1. 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控：提供轉(zhuǎn)錄因子名稱及ID、靶基因名稱及ID,。
2. miRNA靶基因驗(yàn)證：提供miRNA名稱,、物種信息、靶基因名稱及ID,。
3. 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,，如無(wú)特殊要求，默認(rèn)使用293T細(xì)胞,。
4. 如有基因模板或構(gòu)建好的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)載體,，可以提供,。
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